養細胞的小伙伴們都知道,細胞一定要傳代,因為細胞在培養過程中不斷的繁殖,數量也隨之增加,然而培養皿/培養瓶的空間有限,增殖受到抑制,所以必須將一部分細胞移至別的培養皿/培養瓶,讓細胞有足夠生長空間。
細胞傳代也不僅僅是為細胞安一個更大的“家",更重要的,是使細胞系或細胞株進一步增殖,這樣,我們才能有足夠的細胞做各種各樣的實驗。
但是,對于傳代的時間,很多小伙伴都掌握不好,因為對于不同的細胞來說,判斷能否開始傳代的標準略有不同,今天,我們就主要來聊一下,細胞傳代的時間問題。
什么時候進行細胞傳代?
對于貼壁培養和懸浮培養而言,判斷是否需要傳代主要看以下2個方面:
•細胞密度:
貼壁培養細胞進入對數生長期、未達到匯合狀態時即應進行傳代,正常細胞達到匯合狀態時會停止生長(接觸抑制),重新接種后需要較長時間才能恢復,轉化細胞即使達到匯合狀態也能繼續增殖,但是在經過大約兩個倍增時間后通常會變質。類似地,
懸浮培養的細胞進入對數生長期、未達到匯合狀態時也應進行傳代。達到匯合狀態時,懸浮培養的細胞會聚集成團塊,轉動培養瓶時培養基會變得渾濁。
•培養基耗竭:
生長培養基pH值降低通常表示乳酸蓄積,乳酸是細胞代謝的副產物。乳酸有細胞毒性,而且pH值降低也是細胞生長的不利因素。pH值改變的速度通常取決于培養體系中的細胞濃度,細胞濃度越高,培養基耗竭的速度越快。
如果發現pH值迅速降低(>0.1–0.2pH單位),同時細胞濃度增大,則應對細胞進行傳代。
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